%0 Journal Article
%T 结核分枝杆菌毒力基因片段Rv0450c分子克隆及原核表达
%A 吴俐健
%A 李嵚
%A 孙美秋
%A 邹傅
%A 贾本智
%A 苍保宏
%A 王笑歌
%J 中国公共卫生
%P 415-417
%D 2012
%R 10.11847/zgggws2012-28-04-02
%X ？目的通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分枝杆菌耐药相关功能性研究以及抗体制备提供依据。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增Rv0450c基因片段,并克隆到原核表达载体pET28b质粒中,获得的重组质粒转化原核表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳方法检测重组蛋白的表达,并进行纯化。结果从结核分枝杆菌基因组H37RvDNA中成功扩增出Rv0450c基因及编码I161/O371的DNA片段,并构建原核表达质粒pET28b-Rv0450c,pET28b-I161和pET28b-O371重组MMPL4蛋白和I161在大肠杆菌中表达不明显,而膜外区域O371以包涵体形式高表达。结论Rv0450c基因原核表达质粒可以成功构建并在大肠杆菌内较好表达,为进一步MMPL4功能研究和抗体制备打下良好基础。
%K 结核分枝杆菌
%K 多药耐药外排泵系统
%K Rv0450c
%K 表达
%U http://manu40.magtech.com.cn/Jweb_zgggws/CN/abstract/abstract9250.shtml