%0 Journal Article
%T 转化生长因子-β3基因重组腺病毒载体的构建及表达
%A 邱　林
%A 吴清华
%A 肖　军
%A 李明勇
%J 重庆医科大学学报
%D 2012
%X 目的：构建含有转化生长因子-β3（Transforminggrowthfactor-β3，TGF-β3）和增强型绿色荧光蛋白（Enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP）的腺病毒载体，使其转染兔骨髓间充质干细胞（Mesenchymalstemcells，MSCs），并在细胞内得到表达。方法：将含有TGF-β3基因克隆至含有EGFP的穿梭质粒，通过在感受态菌DH5α内同源重组，构建pAdxsi-EGFP-TGF-β3。PacⅠ酶切线性化pAdxsi-EGFP-TGF-β3转染HEK293细胞，多轮“乒乓感染法”扩增收集pAdxsi-EGFP-TGF-β3病毒液，氯化铯梯度离心纯化，PCR和荧光显微镜观察EGFP的表达并检测重组腺病毒液的滴度。测定重组腺病毒液转染MSCs细胞转染效率，Westernblot检测TGF-β3蛋白表达。结果：成功构建携带TGF-β3和EGFP的重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3，PCR和绿色荧光证实病毒包装成功，并具有感染力，病毒滴度为2×1010pfu/ml。Westernblot检测表明Adxsi-EGFP-TGF-β3感染的兔骨髓MSCs细胞有效表达TGF-β3。结论：含有TGF-β3和EGFP的腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3构建成功和TGF-β3蛋白在兔骨髓MSCs中有效表达，为进一步研究转染TGF-β3基因的兔骨髓MSCs减轻创面愈合后瘢痕组织增生提供实验基础。
%K 转化生长因子－β3基因
%K 增强型绿色荧光蛋白
%K 腺病毒载体
%U http://cyxb.alljournals.ac.cn/cqydxb/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20120804&flag=1