%0 Journal Article
%T 人miR-134真核表达载体的构建及其鉴定
%A 王明菊
%A 张　亮
%A 白顺杰
%A 杨　柳
%A 周婵娟
%A 房　亮
%A 谢　鹏
%J 重庆医科大学学报
%D 2014
%X 目的：构建包含外源性miR-134前体的真核表达载体，并使其在人类少突胶质瘤（oligodendroglia，OL）细胞中表达，为进一步研究miR-134的功能及作用靶标提供技术支持。方法：从人类OL细胞基因组DNA扩增miR-134前体，将所得目的片段克隆到pEGFP-N1载体上，重组质粒经测序鉴定后将其转染至人类OL细胞中，荧光倒置显微镜观察增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP）的表达情况，并采用荧光定量PCR检测miR-134基因水平的表达。结果：pEGFP-miR-134重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带与预期结果一致，经测序可见插入序列正确。将重组质粒转染OL细胞后，荧光定量PCR结果示pEGFP-N1空质粒转染组与空白对照组的miR-134表达水平无统计学差异（P=0.882）；pEGFP-miR-134质粒转染组miR-134表达水平是pEGFP-N1空质粒转染组的52倍，两者具有统计学差异（P=0.023）。结论：通过构建真核细胞表达质粒可以高效表达外源性microRNA分子，为后续的研究奠定实验基础。
%K miR-134
%K 微小ＲＮＡ
%K 真核表达载体
%K 转染
%U http://cyxb.alljournals.ac.cn/cqydxb/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20140424&flag=1