%0 Journal Article
%T 重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用
%A 李素霞
%A 田丽萍
%A 张晓彦
%A 夏文超
%A 龚毅
%A 袁勤生
%J 华东理工大学学报
%P 387-391
%D 2004
%X 用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列，将其重组到原核表达质粒pT7-473中，并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35％，表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下，经Ni-NTA柱纯化，得到羧肽酶原B，在复性液中进行稀释复性后，胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B，然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28．5mg／L)，比活为13．5u／mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物，证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。
%K 羧肽酶原B
%K 羧肽酶B
%K 融合表达
%K 分离纯化
%K 胰岛素原C肽
%U http://journal.ecust.edu.cn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20040495&flag=1