%0 Journal Article
%T 瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)卵黄蛋白原的纯化、性质鉴定及ELISA 检测方法的建立
%A 李育培
%A 刁晓明
%A 盛晓洒
%A 权恒
%A 翟旭亮
%A 李云
%J 海洋与湖沼
%D 2010
%R 10.11693/hyhz201001013013
%X 腹腔注射17β-雌二醇(E2), 使瓦氏黄颡鱼雄鱼在7 天内产生卵黄蛋白原(Vtg)。采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术, 从E2 诱导的雄性瓦氏黄颡鱼血浆中分离、纯化出Vtg, 采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为Vtg, 该Vtg 在非变性条件下分子量约为240kDa, 在SDS变性条件下分子量约为143kDa。纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg 经检测显示可能含有类胡萝卜素, 但没有二硫键, 对热相对稳定。利用纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg, 制备了兔抗瓦氏黄颡鱼Vtg 多克隆抗血清。用双向免疫扩散法测得抗血清的纯度较高, 效价为1:32; Western blotting 检测显示抗血清的特异性较好。以瓦氏黄颡鱼Vtg 多克隆抗血清为抗体, 以纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg 为抗原, 建立了间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测瓦氏黄颡鱼体内Vtg 的含量, 标准曲线线性部分的线性方程为y = 0.099x + 0.4529 (R2 = 0.9327), 该方法检测的灵敏度为15.6ng/ml, 工作范围为31.2—4000ng/ml, 在此范围内,标准曲线具有良好的线性。
%K 瓦氏黄颡鱼
%K 卵黄蛋白原
%K 纯化
%K 多克隆抗血清
%K 酶联免疫吸附反应(ELISA)
%U http://www.marinejournal.cn/hyyhz/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=201001013&flag=1