%0 Journal Article
%T 由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒
%A 聂玉春
%A 陈建国
%A 丁明孝
%J 科学通报
%P 1059-1063
%D 2003
%X 通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序.与已知其他几株CSFV代表毒株F114,Brescia,Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%,96.80%,86.03%和95.70%;氨基酸同源性分别为99.28%,98.54%,93.33%和97.41%.将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA,插入pMC18质粒SalⅠ/XbaⅠ之间,得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297.用T7RNA聚合酶进行体外转录,转录出的RNA转染PK-15细胞,细胞上清液经扩增后,测定上清液中病毒滴度.质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似.将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置,获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2,体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2.两种嵌合体病毒均能感染PK-15,SK-6和原代猪睾丸细胞,间接免疫荧光检测显示较vM12297弱,在PK-15细胞上滴度达到8×10F-PFU/mL.这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.
%K 猪瘟病毒
%K 全长cDNA克隆
%K 感染性RNA
%K 转染
%K 体外转录
%U http://csb.scichina.com:8080/CN/abstract/abstract368297.shtml