%0 Journal Article
%T HSV/AAV嵌合病毒法制备rAAV/hFⅨ及其安全性检测
%A 陈立
%A 邹蓓艳
%A 陈浩明
%A 伍志坚
%A 吴小兵
%A 卢大儒
%A 薛京伦
%J 科学通报
%P 1054-1058
%D 2003
%X 构建了由CMV启动子调控的人凝血因子Ⅸ小基因的重组腺相关病毒载体,并通过HSV/AAV杂合辅助病毒的方法大量制备成重组腺相关病毒颗粒(rAAV/hFⅨ).经Southerndotblot及QC-PCR法测定,滴度达到3.6×1012vg(病毒基因组)/mL.将rAAV/hFⅨ病毒以7.5×1011vg/只直接注射到血友病B小鼠股四头肌中,检测到人Ⅸ因子最高表达量达到387ng/mL血浆,持续表达时间12周.血浆中产生的抗体情况与表达曲线相吻合.实验结果表明,采用HSV/AAV杂合辅助病毒法能够有效解决AAV载体的大量制备问题,QC-PCR法检测重组腺相关病毒的滴度比传统的点杂交法更加快速准确.RT-PCR检测表明重组AAV中没有野生型HSV的污染,PCR检测表明重组AAV注射后,重组AAV病毒仅存在于注射点附近的肌肉中,未见扩散.
%K 重组腺相关病毒载体
%K 人凝血因子Ⅸ小基因
%K 杂合病毒
%K QC-PCR
%U http://csb.scichina.com:8080/CN/abstract/abstract368298.shtml