%0 Journal Article
%T 19-去甲睾酮单克隆抗体的筛选及icELISA方法的建立
%A 姜金庆
%A 张海棠
%A 范国英
%A 马金友
%A 王自良
%A 王建华
%J 科学通报
%P 1622-1628
%D 2011
%X 采用细胞融合技术筛选抗19-去甲睾酮(nortestosterone,NT)单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)杂交瘤细胞株,体内诱性腹水法制备NTmAb,建立异源性间接竞争ELISA(indirectcompetitiveELISA,icELISA)标准曲线,并对其特异性、理化因素的影响和基质效应性进行探讨.结果表明,筛选的5株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水效价为0.64×105~2.56×105,半数抑制浓度IC50为0.55~1.0ng/mL,抗体为IgG1亚型,具k轻链,亲和常数Ka为2.6×109~4.7×109L/mol.建立的icELISA标准曲线在磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline,PBS)中的线性检测范围为0.004~85.8ng/mL,IC50值为0.55ng/mL,检测限(limitofdetection,LOD)为0.002ng/mL;抗体与17a-去甲睾酮的交叉反应率(cross-reactivity,CR)为62%,与其他化合物无CR.标准品稀释液中甲醇的最佳含量为10%,牛尿120倍稀释可消除基质干扰,ELISA方法和液质联用检测(LC-MS/MS)的相关性良好(R2=0.9871).
%K 19-去甲睾酮
%K 杂交瘤细胞株
%K 单克隆抗体
%K 间接竞争ELISA
%K 牛尿
%U http://csb.scichina.com:8080/CN/abstract/abstract503949.shtml