%0 Journal Article
%T 小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析
%A 许炼
%A 高焕娟
%A 潘志针
%A 朱育菁
%A 陈清西
%A 刘波
%J 昆虫学报
%P 1272-1280
%D 2014
%X 【目的】克隆和表达小菜蛾Plutellaxylostella氨肽酶基因，并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠cDNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠cDNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2853bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871kDa,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为PxAPN5（GenBank登录号:KM034756）。PxAPN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有“HEXXH”锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichiacoli中原核表达PxAPN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110kDa附近出现特异性条带；酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1047.2U/g。配体印迹结果显示表达的PxAPN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,PxAPN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变，并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶，并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合；通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。
%K 小菜蛾
%K 氨肽酶基因
%K 基因分析
%K 原核表达
%K 酶活性
%K 配体印迹
%K 同源建模
%U http://www.insect.org.cn/CN/abstract/abstract13994.shtml