%0 Journal Article %T 深圳地区粉尘螨Ⅱ类变应原基因的多态性分析及其表达蛋白的变应原性鉴定 %A 白羽 %A 吉坤美 %A 刘志刚 %A 蔡成郁 %J 昆虫学报 %P 560-566 %D 2007 %X 粉尘螨Ⅱ类变应原(DerfⅡ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原之一,可引发Ⅰ型变态反应。从深圳地区挑取活粉尘螨,经形态鉴定后纯培养,提取其总RNA,RT-PCR扩增出DerfⅡ基因,克隆到pMD18-T载体后测序。通过计算机软件分析该基因的多态性。将该目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-DerfⅡ。工程菌经IPTG诱导培养,表达DerfⅡ目的蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。重组DerfⅡ蛋白通过6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,并进行Westernblot检测该重组蛋白与对粉尘螨过敏患者血清中IgE的反应性。结果表明,克隆的5株深圳地区的DerfⅡ基因与GenBank公布的DerfⅡ(AB195580.1)核苷酸序列同源性为96.8%~99.3%,推导的氨基酸序列同源性为93.8%~98.6%。表达纯化的5种重组DerfⅡ蛋白经Westernblot检测,表明都具有良好的变应原性。 %K 粉尘螨 %K Der %K fⅡ %K 变应原 %K 基因多态性 %K 原核表达 %U http://www.insect.org.cn/CN/abstract/abstract9799.shtml