%0 Journal Article
%T 家蚕基质金属蛋白酶基因Bm-MMP的克隆、序列分析及表达研究
%A 管京敏
%A 李兵
%A 王东
%A 刘衬丽
%A 沈卫德
%J 昆虫学报
%P 353-362
%D 2009
%X 基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMPs）家族是一类蛋白水解酶,能够降解基底膜和细胞外基质中大部分蛋白质。为了研究MMPs对家蚕Bombyxmori基本生理功能的影响,本文利用RACE和RT-PCR方法,首次从家蚕蛹中克隆了一个MMP基因的全长cDNA,命名为Bm-MMP。序列分析表明,Bm-MMP的mRNA存在两个选择性剪切变体,分别命名为Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2。其中Bm-MMP-V1cDNA全长为2257bp,包含一个1686bp的开放阅读框,编码561个氨基酸,预测蛋白质分子量约为62.3kD；Bm-MMP-V2cDNA全长为2188bp。同源性分析表明,Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2的氨基酸序列与蜡螟Galleriamellonella的Gm1-MMP的氨基酸序列同源性最高,均为88.8%；与黑腹果蝇Drosophilamelanogaster的Dm1-MMP的氨基酸序列同源性,分别为61.2%和64.3%。将Bm-MMP-V1的编码区连接到表达载体pET28a(+)上,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达,SDS-PAGE和Westernblot分析结果表明,带有6×His标签的融合蛋白被成功表达。半定量RT-PCR分析表明,Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2在4龄眠蚕、熟蚕、吐丝后36及48h、预蛹中的表达量比5龄中食期与化蛹后的表达量高,推测该基因与家蚕幼虫蜕皮变态有关；LPS诱导5龄3d的幼虫,其Bm-MMP-V1和Bm-MMP-V2在血液中的表达量升高,推测Bm-MMP可能与免疫相关。本研究为进一步研究Bm-MMP在家蚕体内的作用机制奠定了基础。
%K 家蚕
%K 基质金属蛋白酶
%K RACE
%K 序列分析
%K 表达谱
%K 半定量RT-PCR
%U http://www.insect.org.cn/CN/abstract/abstract9406.shtml