%0 Journal Article
%T 黑曲霉N25植酸酶phyA基因在巴斯德毕赤酵母中高效表达的研究*
%A 王红宁
%A 马孟根
%A 吴琦
%A 刘世贵
%A 罗燕
%J 菌物学报
%D 2001
%X 从黑曲霉N25(A.nigerChinastrain)中提取出染色体DNA,根据已经测定出的植酸酶phyA基因全序列设计了一对引物,采用高保真度的聚合酶Advangage-HF扩增到了去除信号肽和内含子后约1.4kb片段,对该片段进行了克隆及序列测定。将该序列与植酸酶phyA基因全序列进行了比较。以此片段构建成功了pPIC9K-phyA载体(命名为pPNP-1),并转化毕赤巴斯德酵母。经G418抗性筛选、酶活性测定、Southern印迹和Western印迹,获得了高效表达的转化子PP-NP-1(23869.4u/ml)、PP-NP-2(20533.0u/ml)、PP-NP-3(35646.7u/ml),其酶活性分别是出发菌株的酶活(513.4u/ml)的46.46倍、39.99倍和69.46倍,且转化子具有很好的遗传稳定性。
%U http://manu40.magtech.com.cn/Jwxb/CN/abstract/abstract2713.shtml