%0 Journal Article %T 产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达 %A 宋占科 %A 王小艳 %A 陈国强 %A 李春 %J 化工学报 %P 3101-3106 %D 2008 %X 产紫青霉(PenicilliumpurpurogenumLi-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6mg•L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368U•mg-1。 %U http://www.hgxb.com.cn/CN/abstract/abstract9368.shtml