%0 Journal Article
%T β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性高效筛选体系的构建与应用
%A 吕波
%A 冯旭东
%A 李春
%J 化工学报
%P 3189-3194
%D 2015
%R 10.11949/j.issn.0438-1157.20150788
%X 分子改造是提高β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)在生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)过程中的键选择性的有效方法,但高通量筛选方法的缺失是限制其发展的重要瓶颈。为解决该问题,在大肠杆菌中构建了组成型表达β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E),利用温度诱导表达噬菌体裂解酶SRRz实现原位裂解的一锅法(one-pot)甘草酸键选择性筛选体系(CELS);同时考察了启动子强度对PGUS-E外源表达的效果,优化了不同温度下裂解酶SRRz的表达对酶释放效率的影响。结果表明,CELS筛选体系成功实现了集培养、产酶、裂解和反应于一体化工艺,并将其应用于PGUS-E的非理性改造,获得了一系列键选择性显著提高的突变酶。研究证明,TIM桶状结构域中α螺旋结构的变化对甘草酸键选择性的改善有很大的影响。
%K β-葡萄糖醛酸苷酶
%K 生物催化
%K 分子生物学
%K 优化设计
%K 键选择性
%U http://www.hgxb.com.cn/CN/abstract/abstract17364.shtml