%0 Journal Article
%T 重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性
%A 王俊雄
%A 关怡新
%A 姚善泾
%J 化工学报
%P 709-716
%D 2015
%R 10.11949/j.issn.0438-1157.20141141
%X 将携带重组瑞替普酶(reteplase,rt-PA)的质粒成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达获得包涵体,考察了诱导剂浓度、培养温度和培养时间等条件对目标蛋白表达量的影响。在此基础上,对高效表达的rt-PA包涵体体外复性过程进行了详细研究。首先利用单因素实验考察了复性液pH、GSH浓度、GSH/GSSG比例、蛋白浓度等各种复性条件对复性效果的影响;并结合正交实验设计,进一步研究了高蛋白浓度下复性后rt-PA酶活变化情况。以0.2mmol·L-1IPTG诱导,在33℃下培养6h,每升发酵液约可获得1.7g粗制包涵体。适宜的复性条件为蛋白浓度50mg·ml-1,pH10.0,GSH浓度1mmol·L-1,GSH/GSSG比例8,复性收率为87.2%。影响高蛋白浓度下rt-PA复性的关键因素为复性液初始pH及GSH浓度,在800mg·ml-1蛋白浓度下复性后rt-PA比活可达7.54×104IU·mg-1,荧光光谱分析结果表明复性后rt-PA恢复了其天然态结构。
%K 生物分离
%K 蛋白质复性
%K 二硫键
%K 正交实验设计
%K 瑞替普酶
%U http://www.hgxb.com.cn/CN/abstract/abstract16851.shtml