%0 Journal Article
%T 小麦TaPDK基因的序列分析、原核表达及纯化
%A 杨书玲
%A 张龙雨
%A 张改生
%A 桑青
%A 刘红占
%A 朱启迪
%A 张新钵
%A 赵新亮
%J 核农学报
%P 1081-1089
%D 2013
%R 10.11869/hnxb.2013.08.1081
%X 为研究TaPDK蛋白在小麦生理型雄性不育过程能量代谢途径中的调控机制。本试验提取小麦花药总RNA并反转录为cDNA,根据GenBank报道的已知小麦PDK基因序列设计引物,扩增TaPDK基因的编码区,采用生物信息学方法对其进行序列分析与功能预测,得出TaPDK的ORF为1095bp,编码364个氨基酸,蛋白分子量为41kD。进一步构建原核表达载体PET23d-PDK,转化到大肠杆菌表达菌种E.coliBL21(DE3)中进行优化表达,融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Westernblot验证后利用亲和层析柱初步纯化,针对原核表达过程中出现的非特异蛋白,采用切胶处理的方法进行二次纯化。原核表达结果表明IPTG可诱导一个分子量约40kD的特异蛋白,且主要以包涵体的形式存在,优化表达条件为:28℃、0.8mmol·L-1IPTG、150r·min-1诱导表达4h,表达产物经两次纯化得到2mg的目的蛋白,为下一步制备多克隆抗体、寻找互作蛋白奠定基础。
%K 小麦
%K TaPDK基因
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%K Western
%K blot
%U http://www.hnxb.org/CN/abstract/abstract11151.shtml