%0 Journal Article
%T 抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达
%A 刘喜富
%A 萧飒
%A 顾征
%A 王勇
%A 陈艾
%A 林晴
%A 张卫国
%A 黄华梁
%A 孙健
%A 陈润生
%A 沈倍奋
%A 陈
%J 中国科学 生命科学
%P 428-435
%D 1996
%X 设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因VH和VK,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因VH,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆VH基因插入表达载体pCOMB3和pGEX-4T-1中进行表达.经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Westernblot分析以及ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及M13基因Ⅲ-VH改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的30％左右.
%K 单链抗体
%K 改形抗体
%K 基因构建及表达
%K 分子设计
%U http://life.scichina.com:8082/sciC/CN/abstract/abstract402575.shtml