%0 Journal Article
%T 利用正交法确定测定意大利蜜蜂幼虫细胞色素p450o-脱乙基活性最佳反应条件
%A 唐晓伟
%A 高希武
%A 刁青云
%J 应用昆虫学报
%D 2011
%X (1中国农业科学院蜜蜂研究所北京100093；2中国农业大学昆虫学系北京100193)摘要荧光分光光度法检测意大利蜜蜂apismelliferaligusticaspinol细胞色素p450о脱乙基活性方便快捷、较灵敏，以7乙氧基香豆素为底物，通过测定其产物7羟基香豆素的荧光变化来确定细胞色素p450о脱乙基的活性。在利用荧光分光光度法检测意大利蜜蜂幼虫细胞色素p450о脱乙基活性过程中，反应体系ph值、反应时间、反应温度对实验结果影响较大，本实验在确定最佳底物终浓度和辅酶nadph终浓度的前提下用正交法研究了ph值、反应时间、反应温度3个因素对意大利蜜蜂细胞色素p450о脱乙基活性的影响。极差分析和方差分析表明,3个因素对实验结果影响大小顺序为：时间>温度>ph值，并且得到最佳组合条件为：反应时间20min、温度40℃及ph值78。关键词意大利蜜蜂，细胞色素p450о脱乙基活性，正交试验，荧光分光光度法，最佳条件theoptimumconditionsforassaying7ethoxycoumarinodeethoxylationofcytochromep450fromtheitalianhoneybee(apismelliferaligusticaspinol)byorthogonalmatrixmethodtangxiaowei1,2**gaoxiwu2diaoqingyun1***(1instituteofapiculturalresearch，chineseacademyofagriculturalscience,beijing100093,china;2departmentofentomology，chinaagriculturaluniversity，beijing100193,china)abstractthe7ethoxycoumarinodeethoxylation（ecod)activityofcytochromep450（cytp450)wasdeterminedusingfluorescencespectrophotometrywith7ethoxycoumarinasasubstrate.thismethodwassensitiveandconvenient.theoptimalconditionsforassayingtheecodactivityofcytochromep450（cytp450)inapismelliferaligusticaspinolweredeterminedusingtheorthogonalmatrixmethod.theresultsshowthatreactiontimewasthemostimportantfactordeterminingtheecodactivityofcytp450inhoneybees.therelativeimportanceoftime,temperatureandphontheecodactivityofcytp450were,indescendingorder,time>temperature>ph.theoptimalconditionswerephof78,reactiontemperatureof40℃andreactiontimeof20minutes.keywordsapismelliferaligustica,odeethoxylation,cytochromep450monooxygenase,orthogonalexperiment,fluorescencespectrophotometry,optimalconditions
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