%0 Journal Article
%T Identificaci¨®n molecular y actividad sobre sustratos cromog¨¦nicos de la venombina A del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox Molecular identification and activity upon chromogenic substrates of a venombin A from Bothrops atrox Peruvian snake venom
%A Gustavo A. Sandoval
%A Fanny Lazo
%A Edith Rodriguez
%A Armando Yarlequ¨¦
%J Revista Peruana de Biolog¨ªa
%D 2011
%I Ciudad Universitaria, Lima
%X En el presente trabajo se ha realizado la identificaci¨®n molecular de la enzima similar a trombina (EST) del veneno de Bothrops atrox y se ha evaluado su actividad enzim¨¢tica sobre diversos sustratos sint¨¦ticos. La enzima fue purificada utilizando tres pasos cromatrogr¨¢ficos, sobre Sephadex G-75, CM-Sephadex C-50 y Agarosa-PAB, determin¨¢ndose su peso molecular por PAGE-SDS. La identificaci¨®n molecular de la enzima aislada se realiz¨® por la t¨¦cnica de peptide mass fingerprinting basada en espectrometr¨ªa de masas MALDI-TOF y posterior an¨¢lisis in silico. Las actividades fibrinocoagulante y amidol¨ªtica fueron ensayadas sobre fibrin¨®- geno bovino y BApNA, respectivamente, as¨ª como la hidr¨®lisis sobre los sustratos cromog¨¦nicos espec¨ªficos S-2238, S-2251 y S-2266. Como resultado de los ensayos bioqu¨ªmicos y estructurales, la EST del veneno de B. atrox, present¨® un peso molecular de 29,6 kDa. El an¨¢lisis mediante espectrometr¨ªa de masas de los p¨¦ptidos obtenidos, permiti¨® identificar a esta enzima como una venombina A, presentando una identidad del 75%. Del an¨¢lisis de actividad enzim¨¢tica, se obtuvo que la EST de B. atrox produjo coagulaci¨®n del fibrin¨®geno bovino y present¨® actividad sobre BApNA, S-2238 y S-2266, siendo incapaz de hidrolizar el sustrato S-2251. El empleo de estas aproximaciones estructurales y funcionales ha permitido lograr la identificaci¨®n molecular del principal componente del veneno de B. atrox relacionado con su acci¨®n coagulante, as¨ª como evaluar en detalle la naturaleza de su actividad enzim¨¢tica sobre diversos sustratos. n this work, the thrombin-like enzyme (TLE) from Bothrops atrox has been identified by mass spectrometry and its enzymatic activity evaluated upon several synthetic substrates. The enzyme was purified to homogeneity using three chromatography steps on Sephadex G-75, CM-Sephadex C-50 and Agarose-PAB. Also, molecular weight by PAGE-SDS was determined. For molecular identification of this enzyme, mass spectrometry-based peptide mass fingerprinting was used and later in silico analysis. Enzymatic activities were determined using bovine fibrinogen, BApNA and also upon specific chromogenic substrates such as S-2238, S-2251 y S-2266. As a result of these biochemical and structural procedures, we obtained a TLE from B. atrox venom with a molecular weight of 29,6 kDa. Mass spectrometry analysis of obtained peptides, allow us to identify this enzyme as a venombin A, showing a 75% sequence homology. After recording enzymatic activity, this TLE showed coagulant activity on bovine fibrinogen and upon BApNA, S-2238 y S-2266, bei
%K Bothrops atrox
%K enzima similar a trombina
%K MALDI-TOF
%K sustratos cromog¨¦nicos.
%U http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb/article/view/12