%0 Journal Article
%T Preparation of a working seed lot of BCG and quality control by PCR genotyping Preparaci車n de un lote semilla de trabajo de BCG y control de calidad por genotipificaci車n por PCR
%A A Trovero
%A C Arg邦elles
%A A Cataldi
%J Revista argentina de microbiologˋ-a
%D 2010
%I Asociaci車n Argentina de Microbiolog赤a
%X The bacillus Calmette-Gu谷rin (BCG) was obtained in 1920 after successive passages leading to the attenuation of a Mycobacterium bovis strain. For the following 40 years, BCG had been replicated, resulting in substrains with genotypic and phenotypic differences. Several genomic studies have compared two BCG strains, M. bovis and Mycobacterium tuberculosis, and observed that deleted regions in the different strains could be related to differences in antigenic properties. In this work, a working seed lot was obtained from a lyophilized secondary seed lot from the BCG Pasteur strain 1173 P2 and genetically characterized. The genome was analyzed by PCR directed to five regions (RD1, RD2, RD14, RD15, DU2), using the seed lot and different available strains as templates. No genetic differences were found in the fragments studied as compared to the Pasteur strain. A total of 20 passages were carried out and no differences were found in the size of the fragments amplified by PCR. In conclusion, this method allows to control a working seed lot genotypically and to assess the stability of the BCG genome. El bacilo de Calmette-Gu谷rin (BCG) se obtuvo en 1920, despu谷s de sucesivos pasajes que llevaron a la atenuaci車n de una cepa de Mycobacterium bovis. A lo largo de los 40 a os subsiguientes la cepa BCG fue replicada y surgieron subcepas con diferencias fenot赤picas y genot赤picas. Se realizaron varios estudios de comparaci車n gen車mica de diferentes cepas de BCG, M. bovis y Mycobacterium tuberculosis, y se observ車 que las deleciones de regiones en las diferentes cepas podr赤an estar relacionadas con diferencias en las propiedades antig谷nicas. En este trabajo se describe la preparaci車n y caracterizaci車n gen谷tica de un lote semilla de trabajo obtenido a partir de un lote semilla secundaria liofilizado de la cepa BCG Pasteur 1173 P2. Se analizaron por PCR cinco regiones (RD1, RD2, RD14, RD15, DU2) en el lote semilla de trabajo utilizando como control las diferentes cepas disponibles. No se hallaron diferencias gen谷ticas en los fragmentos estudiados al comparar el lote semilla de trabajo con la cepa BCG Pasteur 1173 P2. Asimismo, se efectuaron hasta 20 pasajes y no se encontraron diferencias en el tama o de los fragmentos amplificados por PCR. En conclusi車n, se ha puesto a punto un m谷todo que permite controlar el genotipo de un lote semilla de trabajo y evaluar la estabilidad del genoma del BCG.
%K BCG strains
%K Genome
%K Working seed lot
%K PCR
%K Quality control
%K Cepas BCG
%K Genoma
%K Lote semilla de trabajo
%K PCR
%K Control de calidad
%U http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100002