%0 Journal Article
%T Evaluaci車n de la enucleaci車n asistida por demecolcina como m谷todo para evitar la exposici車n a luz UV en la producci車n de embriones bovinos por t谷cnica de clonaci車n Evaluation of demecolcine assisted enucleation as a method to avoid the UV exposure in the bovine embryos production by cloning
%A L.N. Moro
%A G. Vichera
%A R. Olivera
%A D. Salamone
%J InVet
%D 2010
%I Universidad de Buenos Aires
%X La clonaci車n es una t谷cnica con gran potencial cient赤fico y econ車mico, aunque a迆n ineficiente. La luz ultravioleta (UV) utilizada durante la enucleaci車n del ovocito genera cambios estructurales y funcionales, afectando la viabilidad de los embriones reconstituidos. El inhibidor de microt迆bulos demecolcina (DMC) permite generar una protrusi車n visible conteniendo al n迆cleo del ovocito, evitando la utilizaci車n de luz UV para su ubicaci車n y extracci車n. Inicialmente los ovocitos fueron tratados con 0,4米g/ml DMC durante toda la maduraci車n in vitro (24h) o desde las 21h, obteniendo un 61,4% y 87% de n迆cleos ubicados en protrusi車n, respectivamente. En un segundo experimento los ovocitos fueron tratados con 0,4 米g/ml DMC luego de exposici車n a ionomicina, logrando un 52,7% de eficiencia. Finalmente, se extrajeron los n迆cleos de ovocitos con protrusi車n generados con el mejor tratamiento (DMC21h), sin exponerlos a radiaci車n UV. Cada ovocito enucleado sin zona pel迆cida fue electro-fusionado con una blast車mera de un embri車n FIV de 8 c谷lulas. El grupo control no se expuso a DMC y se utiliz車 luz UV en la enucleaci車n. No hubo diferencias estad赤sticas en las tasas de clivaje (67% vs 76%) ni de blastocistos (7,4% vs 3,8%) entre ambos grupos, aunque con el nuevo tratamiento la enucleaci車n result車 t谷cnicamente m芍s sencillo. Cloning is a powerful scientific and economical tool, though inefficient. The ultraviolet irradiation (UV) used for oocytes enucleation generates structural and functional changes, affecting the viability of reconstructed embryos. The microtubule inhibitor demecolcina (DMC) permits the production of a cytoplasmic protrusion containing the oocyte nucleus, avoiding the UV irradiation for its identification and removal. Initially, oocytes were exposed to 0,4米g/ml DMC during whole in vitro maturation (24h) or after 21h, obtaining 61,4% and 87% of the nuclei inside a visible protrusion, respectively. In a second experiment oocytes were incubated in 0,4米g/ml DMC after ionomycin exposure, with 52,7% efficiency. Finally, protrusion nuclei formed after the best treatment (DMC21h) were removed, without UV radiation. Each enucleated and zona pelucida free oocyte was electro-fused with a blastomere from a 8 cell IVF embryo. Control group was not exposed to DMC and UV was used for the enucleation procedure. No statistical differences were observed in cleavage (67% vs 76%) nor in blastocyst rates (7,4% vs 3,8%) between both groups, although enucleation was technically easier using the new treatment
%K Clonaci車n
%K Demecolcina
%K Radiaci車n ultravioleta
%K Protrusi車n
%K Cloning
%K Demecolcine
%K Ultraviolet radiation
%K Protrusion
%U http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1668-34982010000200009