%0 Journal Article
%T LSSP-PCR para la identificaci車n de polimorfismos en el gen cry1B en cepas nativas de Bacillus thuringiensis
%A Orozco Mera Martha Ilce
%A Bernal Villegas Jaime
%A Hern芍ndez-Fern芍ndez Javier
%J Revista Colombiana de Biotecnolog赤a
%D 2012
%I Universidad Nacional de Colombia
%X T赤tulo en ingles: LSSP-PCR to identify polymorphisms in the gene cry1B of Bacillus thuringiensis native strain Resumen: Se estandariz車 la t谷cnica LSSP-PCR (reacci車n en cadena de la polimerasa con un 迆nico oligonucle車tido en condiciones de baja astringencia), para identificar polimorfismos del gen cry1B en aislamientos nativos de Bacillus thuringiensis (Bt). Se evaluaron 164 aislamientos nativos colombianos identific芍ndose el gen cry1Ba en 11 de estos aislamientos. Los 11 fragmentos amplificados, junto con el de la cepa de referencia Bt subsp. aizawai HD137, se analizaron por LSSP-PCR y los patrones electrofor谷ticos obtenidos se compararon cualitativamente. Con los productos amplificados mediante el oligonucle車tido directo se construy車 un dendrograma utilizando UPGMA que  mostr車 tres agrupamientos con similitud de 83, 79 y 68%. La agrupaci車n con 68% de similaridad correspondi車 al aislamiento nativo BtGC120 que present車 el patr車n de bandas m芍s variable. Con el oligonucle車tido reverso el aislamiento BtGC120 mostr車 una menor variabilidad (43%). La secuencia nucleotidica obtenida de este fragmento de 806 pares de bases mostr車 una identidad de 93% con la secuencia de los genes cry1Bc1 de Bt morrisoni y cry1Bb1 de la cepa BT-EG5847. Se predijo del marco de lectura +3 una prote赤na de 268 residuos amino芍cidicos, con 88% de identidad con la prote赤na Cry1Bc. Esta  secuencia revel車 dos dominios, una endotoxina N implicada en la formaci車n del poro y otra endotoxina M relacionada en el reconocimiento del receptor. La evaluaci車n biol車gica del aislamiento BtGC120 sobre larvas de primer instar del insecto plaga Spodoptera frugiperda, mostr車 una CL50 de 1,896 ng de prote赤na total por cm2. Este estudio muestra que la LSSP-PCR es una t谷cnica que permite identificar de una manera espec赤fica variaciones en las secuencias de los genes cry de Bt, con potencialidad de encontrar nuevos genes con novedosas actividades biol車gicas. : LSSP-PCR (low stringency specific primer-PCR), technique was standardized for polymorphisms in native isolates cry1B genes Bacillus thuringiensis (Bt) identify. 164 isolates were evaluated by identifying the gene colombian native cry1Ba, in 11 of these isolates. The 11 amplified fragments, along with the reference strain Bt subsp. aizawai HD137 were analyzed by LSSP-PCR and electrophoretic patterns obtained were compared qualitatively. With the amplified products with direct oligonucleotide was constructed using UPGMA dendrogram showed three clusters with similarity of 83, 79 and 68%. The group with 68% similarity corresponded to the isolation BtGC120 n
%K Cry1Bc
%K BtGC120
%K Bacillus thuringiensis
%K LSSP-PCR
%U http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/31771