%0 Journal Article
%T Aislamiento y cultivo de protoplastos en Maracuy芍 Isolation and cultive of protoplast in passion fruit
%A Rivera Rodr赤guez Ricardo
%A Perea Dallos Margarita
%J Acta Biol車gica Colombiana
%D 2004
%I Universidad Nacional de Colombia
%X En este trabajo se ajustaron las condiciones para la regeneraci車n de pl芍ntulas a partir del cultivo de protoplastos, proceso indispensable para avanzar hacia la obtenci車n de h赤bridos som芍ticos. Se realiz車 el aislamiento de protoplastos a partir de cotiledones y hojas de pl芍ntulas in vitro de Passiflora edulis var. flavicarpa; estos explantes fueron sumergidos en soluci車n CPW13M para inducir plasm車lisis. Posteriormente se ensayaron tres combinaciones enzim芍ticas, los mayores rendimientos fueron 6,48 x 106 y 4,60 x 106 protoplastos viables /500 mg de tejido, obtenidos respectivamente con la combinaci車n de Celulasa R-10 al 1% y Pectolyasa Y-23 al 0,05% a partir de hojas y la soluci車n enzim芍tica Celulasa al 2% y Macerozima al 0,4% para cotiledones. Las mejores densidades de cultivo para los protoplastos fueron 5 x 104 protoplastos/ml para los obtenidos de cotiledones y 1,5 x 105 protoplastos/ml para los aislados de hojas, empleando el sistema de cultivo en gotas de medio KM8p solidificadas con agarosa al 0,6% y recubiertas con medio l赤quido KM8p con 100 g/l de glucosa y cefotaxim 300 米g/ml. Con las primeras divisiones celulares, se empez車 a disminuir el nivel osm車tico al renovar el medio l赤quido con la mezcla de medio KM8p:KM8 en proporci車n 3:1 y se continu車 cada siete d赤as en proporciones 2:1, 1:1 y 1:3 hasta la obtenci車n de colonias y callos. Los callos fueron transferidos a medio MS con 2 mg/l de BAP y 1 mg/l de AIB para inducir la regeneraci車n en condiciones de iluminaci車n; despu谷s de seis semanas de cultivo se diferenciaron yemas, posteriormente fueron subcultivadas a medio MS sin reguladores de crecimiento para su enraizamiento. In this research we adjust the protoplasts culture and regeneration conditions, necessary to advance into somatic hybrids obtention. Isolation of Passiflora edulis var. flavicarpa protoplasts from in vitro seedlings cotyledons and leaves was carried out. These tissues were plasmolysed in a CPW13M solution, then exposed to enzymatic solutions. The better yields were 6,48 x 106 and 4,60 x 106 protoplasts/500 mg of tissue, reached with the mixture Cellulase R-10 1% and Pectolyase Y-23 0,05% from leaves, and the enzymatic solution Cellulase 2% and Macerozyme 0,4% from cotyledons tissue, respectively. The best densities for protoplasts culture were 5 x 104 protoplasts/ml obtained from cotyledons and 1,5 x 105 protoplast/ml from leaves, employing agarose droplets system, bathing by KM8p liquid media with glucose 100g/l and cefotaxime 300米g/ml. When first cell divisions occurred, the osmotic concentration was reduced by removing the
%K Passiflora
%K Protoplasts
%K Osmotic Level
%K Cefotaxime
%K Regeneration
%U http://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/27100