%0 Journal Article
%T Producci車n de plantas transg谷nicas de Solanum phureja variedad yema de huevo clon 1 mediada por Agrobacteriun tumefaciens
%A D赤azgranados Daza Elba Cristina
%A Chaparro Giraldo Alejandro
%J Acta Biol車gica Colombiana
%D 2006
%I Universidad Nacional de Colombia
%X El objetivo general de este proyecto fue la producci車n de plantas transformadas gen谷ticamente de S. phureja variedad Yema de Huevo Clon 1 que sean potencialmente tolerantes a insectos, rasgo conferido por la inserci車n en su genoma del gen mirl2 derivado del pomelo (Citrus paradisi) que codifica para un inhibidor de proteasas de tipo Serina. Se trabaj車 con el sistema de transformaci車n mediado por Agrobacterium tumefaciens utilizando la cepa LBA4404 que contiene el pl芍smido residente pAL4404 y el vector binario pNOV022 el cual contiene el gen de inter谷s mirl2. Se utilizaron como explantes entrenudos con una longitud de 0,5 a 1 cm provenientes de material in vitro entre cuatro a cinco semanas de edad, los cuales fueron co-cultivados en una concentraci車n bacteriana de 1/50, para posteriormente ser colocados en medio de regeneraci車n sin agente de selecci車n. Se encontr車 que el medio de regeneraci車n m芍s apropiado esta compuesto por Zeatina Rib車sido (ZR 2 mg/L), 芍cido naftalenac谷tico (ANA 0,04 mg/L) y 芍cido giber谷lico (AG3 0,1 mg/L) en el cual se logr車 obtener un 87,6% de callog谷nesis y un 48,6% de regeneraci車n. Posteriormente se estableci車 una poblaci車n de individuos potencialmente transg谷nicos, a partir de los cuales se realiz車 una extracci車n de DNA, organizando los extractos en pools de diez individuos, obteni谷ndose un total de 52 pools, a partir de 520 individuos. Se utilizaron cuatro diferentes cantidades de DNA para un volumen final de 50 米l en la PCR: 150 ng; 300 ng; 600 ng; 1.200 ng y se realiz車 PCR para los dos genes mirl2 (IP) y manA (PMI). Tras el an芍lisis por electrof車resis de los resultados de la PCR para cada uno de los pools no se observ車 la se al de amplificaci車n espec赤fica de los genes de inter谷s, en tanto que se observ車 la se al para los genes end車genos de control. Finalmente se analizaron 62 clones provenientes de un segundo ensayo de transformaci車n, los cuales fueron analizados individualmente. Se trabaj車 con una cantidad de DNA de 600 ng y se realiz車 PCR para los dos genes mirl2 (IP) y manA (PMI), siguiendo las mismas condiciones de trabajo. En esta segunda poblaci車n de regenerantes no se observ車 la amplificaci車n espec赤fica para los genes de inter谷s, sin embargo se observ車 la se al para los genes end車genos de control.
%K S. Phureja
%K Transfecci車n Gen
%K Inhibidor Proteasa
%U http://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/27610