%0 Journal Article
%T 定点突变提高豆豉纤溶酶的酶活力和底物特异性的研究
%A 崔堂兵
%A 郭勇
%A 罗文华
%A 舒薇
%J 自然科学进展
%D 2008
%I 
%X 以pBE—DFE质粒为模板，采用反向长距离PCR技术对豆豉纤溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme，DFE)基因进行定点突变，使位于酶的底物结合区第156位的谷氨酸和第166位的甘氨酸分别替换为丝氨酸和丙氨酸，使临近酶的底物结合区的第169位甘氨酸残基替换为丙氨酸，获得了三个突变体E156S,G166A和G169A.将含突变基因的表达载体转化枯草杆菌WB800，构建了豆豉纤溶酶基因突变体的表达菌株WB800(E156S)；WB800(G166A)和WB800(G166A).将3种表达菌株进行液体发酵培养，结果发现发酵上清液中纤溶酶的纤溶活性为460,790和900U/mL，分别是未突变酶活性(660U/mL)的70%，115%和136%；3种突变酶对合成底物的H-D-Val-Leu-Lys-pNA的酰胺水解活性是未突变酶的17%，125%和121%.
%K 豆豉纤溶酶
%K 定点突变
%K 酶活力
%K 特异性
%K 定点突变
%K 豆豉纤溶酶
%K 酶活力
%K 底物特异性
%K 水解活性
%K 酰胺
%K 合成
%K 酶活性
%K 纤溶活性
%K 上清液
%K 液体发酵培养
%K 发现
%K 结果
%K 菌株
%K 表达载体
%K 基因突变体
%K 枯草杆菌
%K 转化
%K 突变基因
%K 残基
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=01BA20E8BA813E1908F3698710BBFEFEE816345F465FEBA5&cid=96E6E851B5104576C2DD9FC1FBCB69EF&jid=504AF8C1E5476CA7C4EC9DF6FEAC14AC&aid=81FC548A65268082F289410E7C22AFB2&yid=67289AFF6305E306&vid=13553B2D12F347E8&iid=DF92D298D3FF1E6E&sid=4C69616AE50D2DDC&eid=AB1DE136C335A86C&journal_id=1002-008X&journal_name=自然科学进展&referenced_num=0&reference_num=11