%0 Journal Article
%T 双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立
%A 龚国春
%A 戴蕴平
%A 樊宝良
%A 赵春江
%A 王莉莉
%A 王海平
%A 郑敏
%A 李宁
%J 自然科学进展
%D 2002
%I 
%X 以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化.实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10 5 个细胞的最佳转染效率.通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度.从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞克隆,从中选取2个冷冻保存.经PCR检测,证实2个冷冻克隆株均含有所转染的外源基因.
%K 双标记选择载体
%K 牛
%K 胎儿成纤维细胞
%K 电击
%K 基因转染
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=01BA20E8BA813E1908F3698710BBFEFEE816345F465FEBA5&cid=96E6E851B5104576C2DD9FC1FBCB69EF&jid=504AF8C1E5476CA7C4EC9DF6FEAC14AC&aid=A4A132FFF60075CD&yid=C3ACC247184A22C1&vid=59906B3B2830C2C5&iid=59906B3B2830C2C5&sid=0E223208672FF713&eid=7E01AF4ED17ED9B3&journal_id=1002-008X&journal_name=自然科学进展&referenced_num=2&reference_num=6