%0 Journal Article
%T Molecular Clone, Expression, Structure and Function Study of Beijing Fatty Chicken ADSL Gene<br>北京油鸡ADSL基因的克隆、表达及其结构与功能分析
%A LIU Chang-qing
%A LIU Shuai
%A BAO A-dong
%A LU Tao-feng
%A WU Hong-mei
%A ZHANG Hong-hai
%A TANG Xue-xi
%A GUAN Wei-jun
%A MA Yue-hui
%A <br>刘长青
%A 刘 帅
%A 包阿东
%A 陆涛峰
%A 吴宏梅
%A 张洪海
%A 唐学玺
%A 关伟军马月辉
%J 动物学研究
%D 2008
%I Chinese Academy of Sciences
%X 采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5'端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子27号碱基发生C→T突变,该突变使得本来小是核呼吸因子2(NRF-2)结合位点的CTCC突变为NRF-2结合位点CTTC.将ADSL基因完整斤放阅读框重组至融合表达载体pGEX-4T-l中,构建成北京油鸡ADSL基因融合表达载体pOEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示重组融合蛋白在约80.5kD处有特异蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79.该蛋白的表达最随诱导时间的延长而增加,5h达最高值,达到细胞总蛋白的26.9%,且主要以不可溶的包涵体形式存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后Western blotting检测表明其为北京油鸡ADSL蛋白,为其进一步的生物学功能及其应用研究鉴定基础.
%K Beijing fatty chicken
%K Adenylosuccinate lyase
%K Structure analysis
%K Gene expression<br>北京油鸡
%K 腺苷酸琥珀酸裂解酶
%K 结构分析
%K 基因表达
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=7C502F1A6798ACE1B8C57E291C48C7F1&aid=B8DB94F397A8B43D4AD4D32D76AEBC40&yid=67289AFF6305E306&vid=771469D9D58C34FF&iid=E158A972A605785F&sid=A5111BA190517959&eid=FA3423FC1AE95C4E&journal_id=0254-5853&journal_name=动物学研究&referenced_num=0&reference_num=17