%0 Journal Article
%T Cloning, Expression and Characterization of Pyruvate Formate-lyase in Escherichia coli<br>丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究
%A YANG Deng-feng
%A WEI Yu-tuo
%A ZHOU Xin
%A HUANG Zhi-ming
%A HUANG Ri-bo
%A <br>杨登峰
%A 韦宇拓
%A 周兴
%A 黄志民
%A 黄日波
%J 中国生物工程杂志
%D 2006
%I 
%X 丙酮酸甲酸裂解酶(pyruvateformate-lyase,PFL)是厌氧或兼性厌氧微生物中,代谢途径的关键酶之一,为了进一步研究其功能,我们以大肠杆菌JM109菌株基因组DNA为模板,进行PCR扩增大肠杆菌中的pfl基因。为测序方便将所得DNA片段连接到pMD18-T载体上,将测序正确后的pfl基因连接到表达载体pET-22b( )中,重组表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析,在分子量为85kDa处出现新生的蛋白条带。利用金属亲和层析对添加了6×组氨酸标签的PFL进行纯化,对PFL的酶学性质进行了研究。结果表明此酶的最适温度为35℃,最适pH为7.5,米氏常数Km=2.3mmol,Tm=49.9℃。
%K Pyruvate formate-lyase Cloning Expression Characteristics<br>丙酮酸甲酸裂解酶
%K 克隆
%K 表达
%K 酶学性质
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=EB353D2CCE1492F6&yid=37904DC365DD7266&vid=96C778EE049EE47D&iid=5D311CA918CA9A03&sid=D3E34374A0D77D7F&eid=4AD960B5AD2D111A&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=1&reference_num=12