%0 Journal Article
%T Prediction and Prokaryotic Expression of the Mutual Epitope from all Plasmid-mediated AmpC β-lactamases<br>质粒介导的AmpC β-内酰胺酶共有抗原表位的预测及原核表达
%A KONG Lu-ke
%A GUO Jian-wei
%A MA Cong
%A YANG Lin-xi
%A WEI Jie
%A WU Su-xiang
%A <br>孔路科
%A 郭建巍
%A 马骢
%A 杨林西
%A 魏杰
%A 吴素香
%J 中国生物工程杂志
%D 2008
%I 
%X 目的:应用生物信息学方法预测质粒介导的AmpC β-内酰胺酶(pAmpCs)共有抗原表位,并实现pAmpCs共有抗原表位-Trx融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定.方法 运用多序列比较工具找出各型质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的共有相对保守区域,并利用分子生物学软件Biosun预测各亚型pAmpCs的可及性、抗原性、抗原表位、柔性、亲水性等参数,通过综合分析后找出其共有的抗原表位区域pAmpCs1.根据大肠杆菌的密码子偏好性,把氨基酸序列pAmpCs1转变为核苷酸序列pampcs1,采用重叠延伸PCR合成pampcs1片断,并构建原核表达载体pET32a( )/pampcs1.通过测序验证,对含有该重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析后,用Ni-NTA亲和层析法纯化pAmpCs1-Trx融合蛋白,利用Western blot方法鉴定融合蛋白的抗原性.结果:根据预测结果找到了一段各型pAmpCs共有的抗原表位区域pAmpCs1,成功构建了原核表达载体pET32a( )/pampcs1,经IPTG诱导后得到了分子量约为23kDa的融合蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,通过Western blot鉴定该蛋白能被抗AmpC β-lactamases多抗识别.结论:成功构建了pAmpCs1-Trx融合蛋白原核表达载体,并获得了高纯度的pAmpCs1-Trx融合蛋白,初步证明它的抗原性,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了良好的基础.
%K 质粒介导的AmpC
%K β-内酰胺酶(pAmpCs)
%K 生物信息学
%K 抗原表位
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=FA6E39C3C7945C237459D50574F53B31&yid=67289AFF6305E306&vid=D3E34374A0D77D7F&iid=9CF7A0430CBB2DFD&sid=9971A5E270697F23&eid=16D8618C6164A3ED&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=0&reference_num=8