%0 Journal Article
%T Cloning, sequence analysis and expression of dhaT gene from Citrobacter freundii and purification and property of corresponding recombinant enzyme<br>弗氏柠檬酸菌dhaT基因的克隆表达、序列分析、酶的纯化及特性研究
%A QI Xiang-hui
%A LUO Zhao-fei
%A WEI Yu-tuo
%A CHEN Fa-zhong
%A WANG Shan-shan
%A HOU Shou-hai
%A LIAO Dong-qing
%A HUANG Ri-bo
%A <br>齐向辉
%A 罗兆飞
%A 韦宇拓
%A 陈发忠
%A 王珊珊
%A 候守海
%A 廖东庆
%A 黄日波
%J 中国生物工程杂志
%D 2006
%I 
%X 1,3-丙二醇(1,3-propanediol,1,3-PD)是一种重要的化工原料,越来越受到广泛的关注。以弗氏柠檬酸菌(Citrobacter freundii)基因组DNA为模板,通过PCR得到1,3-丙二醇氧化还原酶(1,3-propanediol dehydrogenase,PDOR)的基因dhaT,序列显示与来源于C．freundii DSM 30040 (Genbank U09771)相应基因的相似性为78％。将此基因构建于表达载体pSE380,得到重组质粒pSE-dhaT。重组质粒转化到宿主菌E．coli JM109中进行了表达,重组酶通过镍柱及Sephacral S- 300进行纯化,重组酶SDS-PAGE结果显示有非常明显的单一的42kDa特异性蛋白条带出现。以丙醛为底物测定重组酶还原反应的最适温度为37℃、最适pH为8．0,对丙醛的Km值为10．05mmol／L,最大反应速度Vmax为37．27μmoL／min／mg;以1,3-PD为底物测定重组酶氧化反应的最适温度为25℃、最适pH为10．5,对1,3-PD的Km值为1．28mmob／L,最大反应速度Vmax为25．55μmol／min／mg。重组酶的还原反应比活为49．50U／mg,氧化反应比活为79．72U／mg。该酶同样具有假定的结合Fe2 的G-X-X-H-X-X-A-H-X-X-G-X-X-X-X-X-P-H-G模体保守结构。
%K Citrobacter freundii 1
%K 3-propanediol dehydrogenase Cloning Expression Purification<br>弗氏柠檬酸菌
%K 1
%K 3-丙二醇氧化还原酶
%K 克隆
%K 表达纯化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=625EF0DC8E6C4A14&yid=37904DC365DD7266&vid=96C778EE049EE47D&iid=DF92D298D3FF1E6E&sid=ECE8E54D6034F642&eid=F4B561950EE1D31A&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=0&reference_num=12