%0 Journal Article
%T Inhibitor of Neutrophil Proteinases Elafin Expression in Pichia pastoris and Activity Investigation<br>中性粒细胞蛋白酶抑制剂elafin毕赤酵母表达系统的建立及活性检测
%A WANG Xiao-long
%A ZHOU Xiang-dong
%A <br>王晓龙
%A 周向东
%J 中国生物工程杂志
%D 2006
%I 
%X 中性粒细胞蛋白酶抑制剂elafin是中性粒细胞弹性蛋白酶特异性抑制剂。为建立中性粒细胞蛋白酶抑制剂elafin毕赤酵母表达系统,通过逆转录PCR扩增获取elafincDNA,双酶切后定向克隆至穿梭质粒pPIC9K上。SalI酶切线性化后,电穿孔法转至毕赤酵母GS115菌株中,PCR筛选出阳性克隆,接种至最小甘油缓冲培养基中,甲醇诱导表达后,取上清阳离子交换层析纯化靶标蛋白。分别以western-blot、弹力纤维蛋白-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组elafin免疫原性、抗蛋白酶活性。重组elafin在毕赤酵母系统中呈分泌性表达,产量及活性高,分离纯化简便。此表达系统的建立为其后续研究及临床应用奠定了基础。
%K Neutrophil proteinases inhibitor Elafin Expression Purification Pichia pastoris<br>中性粒细胞蛋白酶抑制剂
%K 表达
%K 纯化
%K 毕赤酵母
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=8F5CCAC09E173047&yid=37904DC365DD7266&vid=96C778EE049EE47D&iid=59906B3B2830C2C5&sid=771469D9D58C34FF&eid=27746BCEEE58E9DC&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=2&reference_num=10