%0 Journal Article
%T Expression of Recombinant Snake Venom Cystatin in Yeast Pichia pastoris and its effects on B16F1 Melanoma Invasion in vitro<br>蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的酵母表达及其对B16细胞体外侵袭的抑制作用*
%A WAN Rong
%A SONG Jun
%A ZHENG Hai-ying
%A ZHANG Xiao-yan
%A LIN Xu
%A LIN Jian-yin
%A <br>万榕
%A 宋军
%A 郑海音
%A 张晓艳
%A 林旭
%A 林建银
%J 中国生物工程杂志
%D 2007
%I 
%X 目的:建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对肿瘤侵袭的生物学作用。方法:利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白,改良Boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对B16F1细胞体外侵袭力的影响。结果:SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14kDa,摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16mg的重组蛋白,经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良Boyden小室实验结果显示:经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的B16F1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58,106±5.9,P<0.01),抑制率为50%。结论:成功实现sv-cystatin的酵母表达,初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠B16F1细胞体外侵袭作用。
%K sv-cystatin Pichia pastoris Secreted expression B16F1 cell Invade<br>蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂
%K 毕赤酵母
%K 分泌表达
%K B16F1细胞
%K 侵袭
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=0483AF3070C33C4B&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=DB817633AA4F79B9&iid=DF92D298D3FF1E6E&sid=659D3B06EBF534A7&eid=96C778EE049EE47D&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=0&reference_num=15