%0 Journal Article
%T Preparation and Pegylation of TNF-α Derivative<br>重组肿瘤坏死因子-α衍生物的制备及聚乙二醇修饰
%A BI Yan-wei
%A LUO Na
%A LONG Hai-ting
%A YANG Zeng-fu
%A YANG Xu
%A LI Jian-feng
%A XU Wei-ming
%A <br>毕研伟
%A 罗娜
%A 龙海亭
%A 杨增福
%A 杨旭
%A 李健锋
%A 徐维明
%J 中国生物工程杂志
%D 2007
%I 
%X 应用搭桥PCR技术,将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除,对hTNF-α的第8/9/10/29/31/157位氨基酸的密码子进行定点突变,将突变后的cDNA插入到pBV220载体中构建重组质粒pBV220-tnf-αD4。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,筛选获得了高效表达TNF-αD4突变体的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45%左右,经硫酸铵沉淀和阳离子交换层析纯化得到纯度达90%以上的重组目的蛋白,比活性达到8×107。用单甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)对TNF-αD4进行修饰,经阳离子交换层析纯化得到mPEG-TNF-αD4,纯度达85%以上,比活性达到8.6×107,系统毒性也有了明显的降低。通过应用PEG修饰肿瘤坏死因子-α,为降低其毒性,增加其活性进行了有益的尝试,为其进一步研究与开发奠定了基础。
%K 重组肿瘤坏死因子-α突变体
%K 表达纯化
%K 单甲氧基聚乙二醇丁醛
%K 生物活性
%K 系统毒性
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=57B59B9D4EE85B8960C625A553ADCEA8&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=DB817633AA4F79B9&iid=59906B3B2830C2C5&sid=BCA2697F357F2001&eid=659D3B06EBF534A7&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=0&reference_num=13