%0 Journal Article
%T Attenuated Salmonella typhimurium as a carrier for prokaryotic and eukaryotic expression vectors<br>减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究
%A John M Dikki
%A CHEN Xue-yan
%A SHUAI Jiang-bing
%A CHEN Ning
%A FANG Wei-huan
%A <br>迪卡
%A 陈雪燕
%A 帅江冰
%A 陈宁
%A 方维焕
%J 浙江大学学报(农业与生命科学版)
%D 2006
%I Zhejiang University Press
%X 本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol?L-1,增加浓度至0.75 mmol?L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol?L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 h.Hela细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究.
%K attenuated Salmonella typhimurium
%K Escherichia coli
%K recombinant plasmid
%K enhanced green fluorescent protein<br>减毒鼠伤寒沙门氏菌
%K 大肠杆菌
%K 重组质粒
%K 增强型绿色荧光蛋白
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=03F54A49DE00578AA0E5DDF5BC021AA7&cid=298920A27C9BAA22346FCA384240FAA4&jid=466C05D88593309B3EB5CF34361E6426&aid=51C077FB15C4D01F&yid=37904DC365DD7266&vid=9971A5E270697F23&iid=38B194292C032A66&sid=FE4C96E058BB2280&eid=5B5B75F4854B8331&journal_id=1008-9209&journal_name=浙江大学学报(农业与生命科学版)&referenced_num=3&reference_num=26