%0 Journal Article
%T 体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡
%A 李碧春
%A 孙国波
%A 孙怀昌
%A 徐琪
%A 高波
%A 周冠月
%A 赵文明
%A 吴信生
%A 包文斌
%A 余飞
%A 陈国宏
%J 中国科学 生命科学
%D 2008
%I 
%X 本研究以重组的绿色荧光蛋白基因为标记,采用公鸡睾丸内转染精原干细胞(sperma togonial stem cells,SSCs)和体外转染SSCs再移植的方法,探索家禽转基因新方法.同时比较了公鸡接受不同剂量外源基因的转基因效率.结果显示:(i)接受外源基因剂量分别为50,100,150和200μg/mL时,48h后睾丸细胞显示绿色荧光的比率分别为4.0%,8.7%,10.2%和13.6%,差异显著(P<0.05).睾丸内注射外源基因第25天后,随着时间的增长,精子表达绿色荧光的百分率逐渐提高,到第70天后表达率达到高峰,且趋于稳定,4个剂量组分别为12.7%,12.8%,15.9%和19.1%.差异显著(P<0.05);(ii)第70天的睾丸冰冻切片观察,曲精细管周边均有荧光表达;(iii)F1代中,56.2%(254/452)的胚盘表达绿色荧光.活鸡血样PCR检测56.5%(13/23)为阳性,Southern blot检测证明外源基因已整合到鸡基因组;F2代中,53.2%(275/517)的胚盘表达绿色荧光.活鸡血样PCR检测52.9%(9/17)为阳性;(iv)F1代和F2代鸡心、肝、肾和肌肉等组织冰冻切片观察和PCR检测,绿色荧光阳性率在50.0%~66.7%之间;(v)体外SSCs转染外源基因后移植,可在受体公鸡睾丸中生长发育,正常产生精子.后代中,12.5%(8/64)的胚盘表达绿色荧光,活鸡血样PCR检测11.1%(2/18)为阳性.结果证明精原干细胞介导转基因是一种简单、高效、可大群体生产转基因鸡的有效途径.
%K 鸡(Gallus
%K gallus)
%K 精原干细胞
%K 绿色荧光蛋白基因
%K 生物反应器
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=DBE4ECF0864647819971514F9C47DC38&aid=37E6E211059FEDCB42654D22EB45667E&yid=67289AFF6305E306&vid=16D8618C6164A3ED&iid=DF92D298D3FF1E6E&sid=C824C8F9F54AE9B9&eid=20ED669EB429E15C&journal_id=1006-9259&journal_name=中国科学C辑&referenced_num=1&reference_num=0