%0 Journal Article
%T Site-directed mutagenesis and function analysis of glgC gene from Escherichia coli<br>大肠杆菌glgC基因的定点突变及功能分析
%A ZHOU Shuang
%A XU Ke
%A HE Ming-Xiong
%A ZHANG Yi-Zheng
%A <br>周爽
%A 许可
%A 何明雄
%A 张义正
%J 遗传
%D 2008
%I 
%X 利用PCR从Escherichia coli JM109基因组中扩增到全长为1 296 bp的glgC基因编码区,通过PCR重组方法进行点突变,获得氨基酸突变的3个突变体,分别是Pro295Ser(Val121Ala,Met151Ile和Val334Asp),Gly336Asp单点突变和Pr0295Ser/Gly336Asp(Lys109Arg),其基因分别命名为295 3,336和295/336 1.将突变和未突变的基因分别克隆到pET32-a,构建重组质粒pET-glgC、pET-295 3、pET-336和pET-295/336 1,在文中分别简称为a、b、c和d.转化大肠杆菌BL21(DE3),在1 mmol/LIPTG诱导下表达.SDS-PAGE电泳分析显示,在约67 kDa处有1条明显与预期大小一致的蛋白质,表明目的基因已得到融合表达.上述转化子的碘染和糖原含量测定结果,第336位的Gly变成Asp后,宿主菌的糖原含量提高;Pr0295Ser/Gly336Asp(Lys109Arg)的突变导致宿主菌的糖原含量与Gly336Asp突变体相近,表明在336突变基因的基础上增加Pr0295Ser的突变没有进一步加大宿主菌中AGPase酶的反馈抑制效应的降低.已有的结果显示,Pr0295Ser可以降低AGPase酶的反馈抑制效应活性,而实验中295 3突变基因转入宿主菌后细胞糖原含量明显降低,推测这个结果可能是295 3中的Va1334Asp的突变造成,而334位的氨基酸可能是AGPase功能域中的一个重要位点.
%K glgC基因
%K 定点突变
%K 重组PCR
%K 原核表达
%K 功能分析
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=3E23F50E071DF18E21B2F5AEE4F1FA5E&aid=7FF3CE7CCE623841C1BDD1A86EB8C296&yid=67289AFF6305E306&vid=340AC2BF8E7AB4FD&iid=F3090AE9B60B7ED1&sid=40295B54D40AE4B3&eid=9129323FE7AA9847&journal_id=0253-9772&journal_name=遗传&referenced_num=0&reference_num=24