%0 Journal Article
%T Effects of overexpression of key enzyme genes on guanosine accumulation in Bacillus amyloliquefaciens<br>解淀粉芽胞杆菌关键酶基因过表达对鸟苷积累的影响
%A He Kuifu
%A Ma Yuechao
%A Du Shanshan
%A Xie Xixian
%A Xu Qingyang
%A Chen Ning
%A <br>He K
%A Ma Y
%A Du S
%A Xie X
%A Xu Q
%A Chen N
%J 微生物学报
%D 2012
%I 
%X 【目的】研究鸟苷生物合成途径中的3个关键酶编码基因(prs,purF,guaB)过表达对解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)发酵生产鸟苷的影响。【方法】利用穿梭表达载体PBE43,构建含有prs、purF和guaB基因的单独表达载体和prs、purF基因的串联表达载体,将它们分别转入鸟苷生产菌B.amyloliquefaciens TA208后,通过实时定量PCR测定各工程菌株内相关基因的转录水平;通过酶活检测分析关键酶基因扩增对肌苷酸脱氢酶活性的影响;通过摇瓶发酵实验考察工程菌株与对照菌株的生长、耗糖和鸟苷积累情况。【结果】转录分析结果表明prs、purF和guaB基因过表达的同时都伴随着自身转录水平的显著上调。与此同时,prs和purF基因单独表达均轻微下调了嘌呤操纵子的转录水平,但是guaB基因的过表达并不影响嘌呤操纵子和prs基因的转录。酶活分析结果表明prs和purF基因扩增并不影响肌苷酸脱氢酶的活性,guaB基因的扩增使其活性提高了126%。摇瓶发酵实验发现prs和purF基因的单独过表达均未促进宿主菌合成鸟苷,而含guaB基因过表达载体的工程菌鸟苷产量较出发菌株提高20.7%。将prs和purF基因串联表达后,鸟苷产量提高14.4%,糖苷转化率增加6.8%。【结论】过表达guaB基因能够大幅提高鸟苷产量,而prs和purF基因只有实现协同表达才能对宿主菌积累鸟苷产生积极影响,为通过代谢工程技术提高鸟苷产量奠定了研究基础。
%K Bacillus amyloliquefaciens
%K guanosine
%K ribose-phosphate pyrophosphokinase
%K amidophosphoribosyl transferase
%K inosine 5′-monophosphate dehydrogenase<br>解淀粉芽胞杆菌
%K 鸟苷
%K PRPP合成酶
%K PRPP转酰胺酶
%K 肌苷酸脱氢酶
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=6872F7A14063ADE55C878C51D8002C06&yid=99E9153A83D4CB11&vid=286FB2D22CF8D013&iid=B31275AF3241DB2D&sid=5A027C8E6C570AAB&eid=00B9006659EBD8AC&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=0