%0 Journal Article
%T Establishment of BHK-21 cell lines stably expressing FMDV 3Dpol gene by retroviral-mediated gene transfer technique<br>转录病毒载体介导的稳定表达口蹄疫病毒3D基因的BHK21细胞系的建立
%A Yanli Bi
%A Xiaoyan Shen
%A Guozheng Cong
%A Xiangtao Liu
%A Huiyun Chang
%A Xuepeng Cai
%A <br>毕研丽
%A 沈小燕
%A 丛国正
%A 刘湘涛
%A 常惠芸
%A 才学鹏
%J 微生物学报
%D 2008
%I 
%X 目的]研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基囚工程疫苗研制提供科学依据.方法]从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建莺组逆转录病毒表达载体pBPSTR1-3D.用pBPSTR1-3D和pVSV-G双质粒瞬时转染GP2-293包装细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染BHK-21细胞,嘌呤霉素持续筛选12 d后获得阳性克隆,并用有限稀释法挑选单个阳性细胞克隆.结果]应用PCR、RT-PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞中扩增到3D基因,证实目的外源基因能转录并被稳定整合进宿主细胞基因组中.经SDS-PAGE、Western blot、间接免疫荧光检测到在不同代次的阳性细胞中有目的蛋白表达.结论]本试验利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将外源基因插入到靶细胞的基因组中,构建了稳定表达口蹄疫病毒RNA聚合酶的包装细胞系,为研究3D基因表达及其蛋白定位提供了方便,也为下一步研究RNA聚合酶生物学功能和疫苗研制提供了科学依据.
%K foot-and-mouth disease virus
%K 3Dpol gene
%K pBPSTR1 vector
%K BHK-21 cell line<br>口蹄疫病毒
%K 3D基因
%K 逆转录病毒载体pBPSTR1
%K BHK-21细胞系
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=5D8C1490693F4388171151D28B2503B9&yid=67289AFF6305E306&vid=B6DA1AC076E37400&iid=5D311CA918CA9A03&sid=CA10C709B736BBEA&eid=9C76A7541E963918&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=1&reference_num=16