%0 Journal Article
%T 金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究
%A 李淑娟
%A 孙永亮
%A 胡道道
%A 陈超
%A 崔亚丽
%J 微生物学报
%D 2007
%I 
%X 以Sepharose CL-6B为载体，环氧氯丙烷为活化剂，羧甲基天冬氨酸（CM-Asp）为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose，并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200 μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量，Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间，介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果，开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究，并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明：对200μL细胞裂解液纯化体系， Co-CM-Asp-Sepharose（50%悬浮液）的优选体积为60μL，最佳孵育时间为30min，洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L，纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL（50%悬浮液）对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比，本介质具有选择性好，清洗条件简单，得到的靶蛋白纯度高等优点。
%K 羧甲基天冬氨酸，Co2+，金属螯合亲和层析，纯化，多聚组氨酸融合蛋白
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=6AB233EFDA6069CC5A3DD65F59A81090&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=EA389574707BDED3&iid=94C357A881DFC066&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=0