%0 Journal Article
%T Cloning of A Laccase Gene from Flammulina velutipes and Study on Its Expression in Pichia pastoris<br>金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究
%A Yin-Bo Zhang
%A Qiong Jiang
%A Mu-Lan Jiang
%A Li-Xin Ma
%A <br>张银波
%A 姜琼
%A 江木兰
%A 马立新
%J 微生物学报
%D 2004
%I 
%X 综合运用cDNA末端快速扩增 (RapidAmplificationofcDNAEnds ,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇 (Flammulinavelutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA ,经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族 ,与已发表的漆酶基因 (AF176 2 30 )的同源性最高 ,在氨基酸水平为 72 %。该结构基因命名为gl ccFv,cDNA命名为lccFv ,其序列提交GenBank ,登录号分别为AY4 85 82 6和AY4 5 0 4 0 6。将lccFv的开放阅读框克隆到毕赤酵母表达载体pHBM90 6 ,转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母GS115 (pHBM5 6 5 )诱导产酶 ,在培养温度 2 0℃、甲醇流加量为 1 0 % (V V)的情况下 ,其分泌表达的LCCFv的最高酶活为 0 10 70U mL ,最适反应温度为 4 5℃ ,最适反应pH值为 3 9,在最适反应条件下其热稳定性和pH值稳定性均较好
%K Laccase gene
%K RT-PCR
%K Pichia pastoris<br>cDNA末端快速扩增
%K 基因组步行
%K 漆酶基因
%K 毕赤酵母
%K 分泌表达
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=63EBA6575F7E5DAE&yid=D0E58B75BFD8E51C&vid=1AE5323881A5ECDC&iid=B31275AF3241DB2D&sid=FA519F4FF622280A&eid=EEAFC972BAD75B1F&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=12&reference_num=15