%0 Journal Article
%T Construction of chicken embryo fibroblasts cDNA expression library<br>鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建
%A LIU Wei
%A GAO Yu-long
%A GAO Hong-lei
%A WANG Xiao-mei
%A XU Xiu-hong
%A <br>刘伟
%A 高玉龙
%A 高宏雷
%A 王笑梅
%A 许修宏
%J 微生物学报
%D 2007
%I 
%X 鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cDNA入门文库,其平均滴度为1.1×106cfu/mL,文库总容量为1.2×107cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入门文库转换为表达文库,经测定平均滴度为5×105cfu/mL,文库总容量为5.5×106cfu,平均插入片段为2411bp,重组率为100%。结果表明,所构建的文库具有较高的重组率和较大的库容量,可作为较高质量的文库来研究IBDV的相关基因,为研究病毒受体和病毒入侵途径,进一步了解IBDV的致病机理奠定了基础。
%K Chicken embryo fibroblast(CEF)
%K Gateway technology
%K cDNA expression library
%K Infectious bursal disease virus(IBDV)<br>鸡胚成纤维细胞(CEF)
%K Gateway技术
%K cDNA表达文库
%K 传染性法氏囊病病毒(IBDV)
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=14FFD8A460CD63DB&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=F4B561950EE1D31A&iid=38B194292C032A66&sid=09AA1448D1EAF9C1&eid=84A93BA251D28205&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=2&reference_num=16