%0 Journal Article
%T Soluble expression of chicken interferon-γ and antiviral activity of purified expression product<br>鸡γ干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗病毒活性
%A Jing Qi
%A Yijun Du
%A Xiaoling Zhu
%A Beixia Hu
%A Shouli Sun
%A Xiumei Zhang
%A Yuqing Liu
%A <br>齐静
%A 杜以军
%A 朱小玲
%A 胡北侠
%A 孙守礼
%A 张秀美
%A 刘玉庆
%J 微生物学报
%D 2009
%I 
%X 【目的】克隆鸡γ-干扰素（chIFN-γ）基因，大肠杆菌表达及产物纯化与活性检测。【方法】通过RT-PCR方法用ConA刺激的20日龄SPF鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出chIFN-γ成熟蛋白基因cDNA，克隆至原核表达载体pET-32a (+)，构建重组表达质粒pET-32a (+)-chIFN-γ，在大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达，利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白，并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。利用MDCK-VSV系统测定抗病毒活性。【结果】克隆得到456 bp 的chIFN-γ成熟蛋白编码基因，大肠杆菌中成功表达chIFN-γ蛋白，分子量约为31.0 kDa，能与抗His的单克隆抗体和兔源多抗血清发生特异性反应。表达蛋白一部分形成包涵体，另一部分以可溶形式存在，可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率为3.0 mg/mL。生物学活性试验表明，1:32 稀释纯化的重组chIFN-γ （rchIFN-γ）孵育MDCK细胞后能抵抗100TCID50的VSV攻击。【结论】通过镍柱天然纯化获得的rchIFN-γ具有较好的抗病毒活性，为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础。
%K chicken interferon-gamma
%K prokaryotic expression
%K purification
%K antiviral activity<br>鸡γ-干扰素
%K 原核表达
%K 纯化
%K 抗病毒活性
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=6EFA05C6E7E59C9792D9A72E0458E100&yid=DE12191FBD62783C&vid=2A3781E88AB1776F&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=CD775AE9DDBD7B53&eid=C753EB8AC8F551B9&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=1&reference_num=14