%0 Journal Article
%T Expression, purification and crystallization of a truncated Saccharomyces cerevisiae diadenosion 5'''' ,5"''''-p1,p4 -tetraphosphate phosphorylase Ⅰ<br>酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段的表达、纯化及晶体培养研究
%A Wenzhe Li
%A Junwei Zhang
%A Ningyu Xu
%A Congzhao Zhou
%A Yuxing Chen
%A <br>李文哲
%A 张钧玮
%A 徐宁宇
%A 周丛照
%A 陈宇星
%J 微生物学报
%D 2008
%I 
%X 目的]为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体,为研究该酶的三维结构和功能打下基础;方法]构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段(Apaldn16)的表达质粒,用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性.将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经.IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况.将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离,收集组分进一步用Superdex 75分子筛纯化.纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性,然后用悬滴气相扩散法进行了蛋白结晶条件的初筛.结果]成功地用大肠杆菌可溶性地高效表达了Apaldn16蛋白.得到了分子量约为36 kD的单一蛋白条带,纯度在95%以上.质谱结果证明该蛋白纯度高,分子量正确.将纯化后的蛋白用悬滴气相扩散法进行晶体初筛,得到了针状簇晶.此晶体经SDS-PAGE检测,证明为Apaldn16蛋白晶体.结论]利用大肠杆菌高效表达体系可以正确表达Apalan16蛋白,蛋白经过纯化后,用悬滴气相扩散法可以生长出针状晶体,适合于进一步的三维结构研究.
%K 二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ
%K 酿酒酵母
%K 表达
%K 纯化
%K 结晶
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=DCA159DBAD452E57047486A1467791EF&yid=67289AFF6305E306&vid=B6DA1AC076E37400&iid=708DD6B15D2464E8&sid=05D0CF7AA2D40B14&eid=111DC5BD3401BA43&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=11