%0 Journal Article
%T Construction of recombinant Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus by zero background Tn7 transposition<br>零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统
%A Lunguang Yao
%A Hongling Zhang
%A Juan Feng
%A Erhui Zhang
%A Zhenzhong Wen
%A <br>姚伦广
%A 张红玲
%A 冯娟
%A 张二辉
%A 文祯中
%J 微生物学报
%D 2009
%I 
%X 摘要：【目的】获得零转座背景的基于家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus, BmNPV) Bac-to-Bac 系统，为高效经济构建重组BmNPV在家蚕体内表达目标蛋白提供新系统。【方法】利用R6Kγ作为复制子构建新的条件复制型杆状病毒转移载体pRADM，同时封闭BmNPV-Bacmid（BmBacmid）宿主菌（Escherichia coli BmDH10Bac）的Tn7转座受体位点attTn7，获得新的封闭型宿主菌E.coli BmDH10Bac△Tn7。【结果】由于pRADM无法在宿主菌E.coli BmDH10Bac中复制，封闭了attTn7位点的宿主菌也不能再和BmBacmid竞争与转移载体的重组，显著提高了转座效率。封闭宿主菌的attTn7位点，能使转座效率提高近4倍，使用条件复制型转座载体pRADM时，转座效率提高近10倍。而用pRADM转座E.coli BmDH10Bac△Tn7时，转座阳性率为100％。避免了获得重组病毒DNA的鉴定程序，缩短了获得重组蛋白所需时间。用携带红色荧光蛋白基因DsRed的重组质粒pRADM-Red转座E.coli BmDH10Bac△Tn7，获得重组BmBacmid转染BmN细胞，红色荧光蛋白在细胞中得到高效表达。【结论】结果表明pRADM和E.coli BmDH10Bac△Tn7是一种零背景高效构建重组BmNPV的新系统。
%K Keywords: conditional replication origin
%K zero background transposition
%K recombinant Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus<br>关键词：条件复制子
%K 零背景转座
%K 重组家蚕核型多角体病毒
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=59D795CD5CEF27D60254F422EB6A9731&yid=DE12191FBD62783C&vid=2A3781E88AB1776F&iid=B31275AF3241DB2D&sid=6D80B994DAB4686B&eid=2C8B50BA95995EA2&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=14