%0 Journal Article
%T Cell-based high throughput screening of a-amino acid ester hydrolase variants<br>全细胞高通量筛选a-氨基酸酯水解酶突变体的方法
%A YE Li-Juan
%A WANG Jia-Min
%A WANG Lu
%A CAO Yi
%A <br>叶丽娟
%A 王佳珉
%A 王辂
%A 曹毅
%J 微生物学通报
%D 2012
%I 
%X 【目的】建立高效敏感的高通量筛选方法，用于筛选头孢克洛合成活性提高或热稳定性提高的a-氨基酸酯水解酶。【方法】根据头孢克洛在碱性条件下水解生成的衍生物在340 nm处有特征吸收峰的原理，制作出标准曲线。采用全细胞96孔板紫外分光光度法高通量测定a-氨基酸酯水解酶突变体的头孢克洛合成活性。【结果】头孢克洛含量与△A340?405在0.1?0.6×10?3 mol/L浓度范围内有良好的线性关系, 服从朗伯-比尔定律, 平均回收率为99.8%?101.3％。一轮定点饱和突变产生的2 300个克隆经该方法的筛选, 获得3株kcat提高40%以上, 4株半失活温度较野生型提高5 °C以上的突变体酶。【结论】该方法准确可靠，每天筛选量可达到2 000个反应, 达到高通量筛选要求。
%K Alpha-amino acid ester hydrolase
%K Cefaclor
%K Ultra-violet spectrophotometry
%K Cell-based high throughput screening
%K Directed evolution<br>a-氨基酸酯水解酶
%K 头孢克洛
%K 紫外分光光度法
%K 全细胞高通量筛选
%K 定向进化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=78024727B5F4EF6AA9CA8E605B5FC464&aid=C3C9E433FF4C68C4B12F1309BE95743B&yid=99E9153A83D4CB11&vid=7C3A4C1EE6A45749&iid=0B39A22176CE99FB&sid=F980D69301C9F2A9&eid=3C314101DD134A30&journal_id=0253-2654&journal_name=微生物学通报&referenced_num=0&reference_num=0