%0 Journal Article
%T Construction of minireplicon of human respiratory syncytial virus?<br>人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建
%A Qian Tang
%A Jiemei Yu
%A Jinsheng He
%A Mei Zhang
%A Wei Wei
%A Yuanhui Fu
%A Xianxian Zheng
%A Xiaobo Wang
%A Ying Zhang
%A Tao Hong
%A <br>唐倩
%A 虞结梅
%A 何金生
%A 张梅
%A 魏薇
%A 付远辉
%A 郑娴娴
%A 王小波
%A 张莹
%A 洪涛
%J 微生物学报
%D 2009
%I 
%X 摘要：【目的】构建RSV微型复制子（minireplicon）并进行功能学研究。【方法】构建含RSV病毒前导序列（Leader, genomic promoter, Le）、转录起始信号（gene start, GS）、多克隆酶切位点、转录终止信号（gene end, GE）和尾随序列(Trailer, antigenomic promoter, Tr)的基因片段GSGE，通过引入T7 RNA多聚酶（T7 RNA polymerase, T7 RNP）启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP）等多步操作，获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。同时构建可表达大蛋白（large protein，L）的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子（M2 ORF 1 protein，M2-1）的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7 RNP的BSRT7/5细胞系，倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。【结果】成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1，五质粒共转染BSRT7/5细胞，倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达。【结论】构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能，将有助于进一步开展以RSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研究。
%K Keywords: human respiratory syncytial virus
%K minireplicon
%K enhanced green fluorescent protein<br>关键词：人呼吸道合胞病毒
%K 微型复制子
%K 增强型绿色荧光蛋白
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=7CA1DE71336A7458AFD811BA49DB6EB2&yid=DE12191FBD62783C&vid=2A3781E88AB1776F&iid=5D311CA918CA9A03&sid=94D812A784CFA7CC&eid=1A775ABEB80E436B&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=11