%0 Journal Article
%T Generation of a recombinant HVT virus expressing the HA gene of avian influenza virus H5N1 by Rde/ET<br>利用Rde/ET技术构建表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒
%A Desong Lan
%A Xingming Shi
%A Yunfeng Wang
%A Changjun Liu
%A Mei Wang
%A Hongyu Cui
%A Guobin Tian
%A Jisong Li
%A Guangzhi Tong
%A <br>兰德松
%A 石星明
%A 王云峰
%A 刘长军
%A 王玫
%A 崔红玉
%A 田国彬
%A 李继松
%A 童光志
%J 微生物学报
%D 2009
%I 
%X 【目的】本研究以火鸡疱疹病毒（HVT） BAC分子克隆为平台，构建表达禽流感HA基因的重组火鸡疱疹病毒，以开发新型病毒活载体疫苗。【方法】利用Red/ET重组技术，经过两步法重组：第一步，用两端带有50 bp大小左、右同源臂a和b的选择标记基因rpsL-neo表达盒替换HVT基因组US2区；第二步，用两端带有同样的50 bp左、右同源臂a和b的HA基因表达盒替换选择标记基因rpsL-neo表达盒。在含有氯霉素和链霉素双抗性的平板上筛选阳性克隆，经卡那霉素抗性反向筛选和PCR进一步鉴定，鉴定正确的克隆命名为pHVT-HA。提取并纯化pHVT-HA DNA，转染原代鸡胚成纤维细胞（CEF），以完成重组病毒的拯救。【结果】命名为pHVT-HA3的BAC克隆转染CEF后第4天，出现病毒噬斑，噬斑形态与野生型HVT相似，获得拯救的重组病毒，命名为rHVT-HA3，将重组病毒rHVT-HA3在CEF上连续传代培养，经PCR和间接免疫荧光检测表明，重组病毒在连续传代过程中仍能稳定表达HA蛋白。【结论】本研究以HVT BAC为平台，利用Red/ET重组技术，构建了表达禽流感A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1) 毒株的血凝素（HA）基因的重组火鸡疱疹病毒，为新型禽流感重组活载体疫苗开发奠定基础。
%K Herpesvirus of Turkeys
%K Bacterial artificial chromosome
%K Red/ET cloning
%K avain influenza virus
%K hemagglutinin (HA) gene<br>火鸡疱疹病毒
%K 细菌人工染色体
%K Red/ET克隆
%K 禽流感病毒
%K HA基因
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=1BDBDBACDC09261ADB6C8AFBC7C26C96&yid=DE12191FBD62783C&vid=2A3781E88AB1776F&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=46CB27789995047D&eid=656F8C8401D91023&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=22