%0 Journal Article
%T Recombinant Expression of Methyl Parathion Hydrolase Gene and Its Purification and Characterization<br>甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究
%A FU Guo-Ping
%A CUI Zhong-Li XU Wei WU Xu-Ping LI Shun-Peng
%A <br>傅国平
%A 崔中利
%A 徐玮
%A 吴旭平
%A 李顺鹏
%J 微生物学报
%D 2004
%I 
%X 用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因，构建了重组表达质粒pET29a_mpd,将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，得到C末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶，用NiNTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时，最适pH86～8.8，最佳反应温度15℃；Mn2+、Zn2+、Cu2+可使酶活性增加15%～20%，Ca2+、Mg2+微弱地促进酶的作用，Ni2+对酶活性几乎无影响；1mmol/L EDTA·Na2+几乎不影响酶的活性，而10mmol/L EDTA·Na2+对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时，最适pH86。25℃时，该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km为（68.6 ± 5.1）μmol/L，kcat为（45 ± 6 ）S-1；对乙基对硫磷的米氏常数Km为（59.5 ± 6.0）μmol/L，kcat为（8 ± 1） S-1。Kcat/Km表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高。
%K Methyl parathion hydrolase
%K Recombinant expression
%K Purification
%K Enyme kinetics<br>甲基对硫磷水解酶，基因表达，NiNTA亲和层析，酶活性
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=0FA49966DEA7629A&yid=D0E58B75BFD8E51C&vid=1AE5323881A5ECDC&iid=38B194292C032A66&sid=35E8A259891FB32F&eid=5DCBAAB000A70168&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=5&reference_num=13