%0 Journal Article %T Cloning and Expression of Trignoposis variabilis D-amino Acid Oxidase in Escherichia coli
三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 %A LUO Hui %A TONG Yi-Zhou %A LI Qiang %A YU Hui-Min %A SHEN Zhong-Yao %A
罗晖 %A 童忆舟 %A 李强 %A 于慧敏 %A 沈忠耀 %J 微生物学报 %D 2004 %I %X 从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET 2 8a连接 ,转化大肠杆菌TOP 1 0F′,并筛选得到重组质粒pET DAAO ,转化BL2 1 (DE3)感受态细胞 ,得到重组大肠杆菌BL2 1 (DE3) pET DAAO。对重组大肠杆菌中的D 氨基酸氧化酶进行了诱导表达 ,考察了诱导温度、菌浓度、诱导剂IPTG用量以及溶氧等因素对酶活的影响。结果表明 ,在 2 8℃、菌浓度 (OD6 0 0 ) 1 0、IPTG浓度 1mmol L时 ,DAAO酶活最高达 2 3 3U mL。研究进一步显示 ,用廉价无毒的乳糖可以替代IPTG进行诱导 ,当乳糖浓度为 2mmol L ,DAAO酶活可达 2 2 7U mL。经过补料分批培养和乳糖诱导 ,DAAO酶活可以达到 1 75U mL。 %K D-amino acid oxidase %K Trignoposis variabilis %K Escherichia coli %K Lactose
D-氨基酸氧化酶 %K 三角酵母 %K 大肠杆菌 %K 乳糖 %U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=DE7A88939A2A2EE7&yid=D0E58B75BFD8E51C&vid=1AE5323881A5ECDC&iid=38B194292C032A66&sid=50EA2A80A7D254EF&eid=5A6705FDACED0BF9&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=3&reference_num=12