%0 Journal Article
%T Cloning and Expression of Trignoposis variabilis D-amino Acid Oxidase in Escherichia coli<br>三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达
%A LUO Hui
%A TONG Yi-Zhou
%A LI Qiang
%A YU Hui-Min
%A SHEN Zhong-Yao
%A <br>罗晖
%A 童忆舟
%A 李强
%A 于慧敏
%A 沈忠耀
%J 微生物学报
%D 2004
%I 
%X 从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET 2 8a连接 ,转化大肠杆菌TOP 1 0F′,并筛选得到重组质粒pET DAAO ,转化BL2 1 (DE3)感受态细胞 ,得到重组大肠杆菌BL2 1 (DE3) pET DAAO。对重组大肠杆菌中的D 氨基酸氧化酶进行了诱导表达 ,考察了诱导温度、菌浓度、诱导剂IPTG用量以及溶氧等因素对酶活的影响。结果表明 ,在 2 8℃、菌浓度 (OD6 0 0 ) 1 0、IPTG浓度 1mmol L时 ,DAAO酶活最高达 2 3 3U mL。研究进一步显示 ,用廉价无毒的乳糖可以替代IPTG进行诱导 ,当乳糖浓度为 2mmol L ,DAAO酶活可达 2 2 7U mL。经过补料分批培养和乳糖诱导 ,DAAO酶活可以达到 1 75U mL。
%K D-amino acid oxidase
%K Trignoposis variabilis
%K Escherichia coli
%K Lactose<br>D-氨基酸氧化酶
%K 三角酵母
%K 大肠杆菌
%K 乳糖
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=DE7A88939A2A2EE7&yid=D0E58B75BFD8E51C&vid=1AE5323881A5ECDC&iid=38B194292C032A66&sid=50EA2A80A7D254EF&eid=5A6705FDACED0BF9&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=3&reference_num=12