%0 Journal Article
%T 地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录
%A 卢捷
%A 姚玉峰
%A 姜卫红
%A 焦瑞身
%J 微生物学报
%D 2003
%I 
%X 乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase EC 6.4.1.2, ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A，该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步，也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌(M. tuberculosis)和天蓝色链霉菌(S. coelicolor)中ACC-α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好，设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约250bp的片段，并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC-α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1797bp，编码一个598个氨基酸的蛋白，推算出的分子量是63,714Da；基因G+C mol%含量为70.1%，符合U32基因结构特征，距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG，并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET28(b)系统构建表达载体，在E. coli BL21(DE3)中实现了accA的诱导表达，产物大部分以可溶形式存在，并通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。Northern Blot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。
%K 地中海拟无枝菌酸菌，乙酰辅酶A羧化酶，生物素羧基载体蛋白，转录调节
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=2D69EBA34A7268F0&yid=D43C4A19B2EE3C0A&vid=BE33CC7147FEFCA4&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=014B591DF029732F&eid=0401E2DB1F51F8DE&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=13